Fattori spermatici che possono avere un influsso negativo sullo sviluppo embrionale sono rappresentati tra l' altro da disturbi della maturazione. Spermatica. Queste alterazioni possono portare a frammentazioni del DNA. Le tecniche finora disponibili per diagnosticare queste alterazioni del DNA erano tecniche invasive per cui gli spermatozoi analizzati non potevano essere utilizzati per la fecondazione. Attualmente esistono delle tecniche non invasive che permettono di analizzare gli spermatozoi che possono essere poi impiegati per la fecondazione. IMSI L’ “Iniezione intracitoplasmica di spermatozoi morfologicamente selezionati” (IMSI) permette la scelta degli spermatozoi utilizzando un microscopio ad alto ingrandimento, senza colorazione e in tempo reale. Numerose pubblicazioni indicano che questa preselezione spermatica può dare un notevole contributo alla riuscita delle tecniche ICSI. Le tecniche ICSI mediante la selezione spermatica ad alto ingrandimento permette di utilizzare gli spermatozoi morfologicamente migliori e dimostra un maggiore indice di gravidanza, soprattutto nei casi in cui le alterazioni spermatiche siano associate ad un alto indice di frammentazione del DNA. Le tecniche IMSI e PICSI permettono in alcuni casi un miglioramento dei risultati. in caso di ICSI senza fertilizzazione; in mancanza di impianto; in presenza di grave teratozoospermia; in presenza di elevata frammentazione del DNA; e probabilmente anche nella infertilità idiopatica. Fattori paterni (spermatici) che possono avere un influsso negativo sullo sviluppo embrionario: ritenzione di citoplasma persistenza di istoni anomalie meiotiche - aberrazioni cromosomiche processi apoptosici frammentazioni del DNA La causa è generalmente una ridotta maturazione spermatica. Diagnosi spermatica World Health Organization >esame spermatico di routine esame spermatico seriale Kruger’s strict criteria spermiogramma con valutazione morfologica Test opzional test swelling ipo-osmotico (HOS) coltura spermatica CASA Sperm Penetration Assay (Hamster-Test) Hemi-Zona Binding Assay Acrosome Reaction Assay Delezione del cromosoma Y Sperm Chromatin (SCSA/TUNEL/Comet Assay) Kreatinine Kinase Assay Situazione attuale in corso di ICSI Selezione di spermatozoi mobili mediante ingrandimento 400 Quello che non sappiano è quale sia realmente lo spermatozoo morfologicamente e funzionalmente migliore. Nuove tecniche per migliorare la selezione degli spermatozoi da utilizzare in corso di ICSI criteri funzionali criteri morfologici Criteri morfologici: IMSI iniezione intracitoplasmica di spermatozoi morfologicamente selezionati Foto con ingrandimento 400X IMSI Bartoov ha messo a punto un sistema per la selezione spermatica mediante alto ingrandimento si analizza a fresco ed in tempo reale la struttura spermatica ad alto ingrandimento Bartoov et al. 2001 N Engl J Med, vol. 345, N°14 Bartoov et coll, 2002 J. Andrology 23:1-8 Bartoov et coll, 2003 Fertil.steril.80:1413-1419 Risultati ICSI utilizzando spermatozoi anomali rispetto a spermatozoi normali: · riduzione dell’indice di gravidanza 20,2% verso 36,7% · riduzione dell’indice d’impianto 9,6% verso 18,7% La preselezione spermatica è essenziale per un miglioramento delle tecniche ICSI (De Vos et al, 2003) Spermatozoi normali ed anomali spermatozoi con morfologia normale teratozoospermia Spermatozoi macrocefalici Conclusioni (I) ICSI mediante preselezione spermatica ad alto ingrandimento consente un aumento dell'indice di gravidanza miglioramenti soprattutto in casi con elevata frammentazione del DNA spermatico miglior indice di embrioni di alta qualità riduzione dell’indice di abortività spontanea si ottiene anche un aumento dell'indice di gravidanza in caso di ridotto grado di frammentazione del DNA spermatico, ma con fallimenti terapeutici non correlati con altre patologie Conclusioni (II) Le possibilità di selezione spermatica mediante test funzionali e morfologici ha portato a nuove prospettive nelle terapie ICSI nei seguenti casi: l’assenza di fecondazione in corso di ICSI nessun impianto teratozoospermia grave (< l0% normali) elevata frammentazione del DNA spermatico infertilità idiopatica Conclusioni (III) Le tecniche presentano un miglioramento delle chance di gravidanza in coppie dove vi è un importante fattore maschile, ulteriori studi su ampia scala sono in corso. PICSI Mediante il cosiddetto test di adesione con ialuronidasi gli spermatozoi vengono selezionati mediante particolari proprietà di adesione della loro membrana. Gli spermatozoi che possiedono questa capacità di adesione sono maturi e non presentano degenerazioni del loro DNA. Gli spermatozoi che rimangono adesi al sistema possono essere utilizzati per le tecniche ICSI.